随着分子生物学的发展,核酸编辑、扩增、测序、鉴定等以核酸为中心的技术变得越来越先进和方便,尤其是单细胞RNA测序、数字PCR和转基因技术的出现,使得核酸技术应用越来越广泛,灵敏度也越来越高。
但同时也产生一些弊端,主要是:
1)PCR实验造成DNA大量合成,不可避免地给实验室带来核酸污染。由于核酸产物不能自动降解,因此只会不断积聚;
2)由于灵敏度升高,少量污染的DNA或RNA分子也会被检测出来,从而造成实验偏差。
3)核酸污染也给实验人员带来未知的健康风险。
而传统的紫外照射法对祛除DNA污染并不理想,因为它仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大。
实验室一旦发生污染,检测工作应立即停止,直到确认消除污染后才能重新开始检测。首先,要查找污染源和明确污染范围。然后,根据污染源和污染范围采取有效的去污染措施,结合各种不同方法以达到最佳效果。
核酸污染清除难点:
1、移液器
移液器内部被污染很难去除,可以通过清洗或者另换一套移液器。
2、生物安全柜
移除内部所有物品,用DNA去除剂擦拭表面后,打开柜门连续运行。
3、核酸提取仪内部
用DNA去除剂擦拭内表面后,打开提取仪门或外罩,静置
实验室污染的处理:
1.标本污染生物安全柜的操作台造成局限污染时:
立即用吸水纸覆盖,并使用0.55%含氯消毒剂或核酸污染去除剂PCR Cleaner进行喷洒消毒。消毒液需要现用现配,24小时内使用。
2.清理污染物时:
严格遵循活病毒生物安全操作要求,采用压力蒸汽灭菌处理,并进行实验室换气等,防止次生危害。
3.标本倾覆造成实验室污染时:
保持实验室空间密闭,避免污染物扩散。立即使用润湿有Novocide PCR Cleaner核酸去除剂的毛巾覆盖污染区。必要时(如大量溢撒时)可用过氧乙酸加热熏蒸实验室,剂量为2g/m?,熏蒸过夜;或20g/L过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾,用量8ml/m?,作用1-2小时;必要时或用高锰酸钾-甲醛熏蒸:高锰酸钾8g/m?,放入耐热耐腐蚀容器(陶罐或玻璃容器),后加入甲醛(40%)10ml/m?,熏蒸4小时以上。熏蒸时室内湿度60%-80%。
因为甲醛有毒有害,有条件的可以使用全自动智能化比林科汉KV3000核酸气溶胶污染去除仪。
PCR Cleaner是一种非碱性、无腐蚀性的核酸去除剂,对人体无害的非致癌物质组成,通过对基础DNA和RNA的不可逆摧毁,达到去除核酸污染的目的,无残留对人员无毒无害。
比林科汉KV3000采用超文丘里原理,将液态核酸去除剂化成1-3um的颗粒状气体,均匀扩散在空气中,无死角覆盖在整个核酸实验室,并快速吸附空气中的气溶胶核酸片段,分解掉核酸污染源。
比林科汉核酸去除仪具备以下优点:
1)纳米级干雾肉眼不可见,渗透性好,无孔不入;
2)智能化控制系统,电脑芯片可升级系统,无线远程操作,操作简单容易;
3)拥有CE/ISO等国内外认证资质,品质过硬;
4)能过快速有效分解掉DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物质,全面解决核酸实验室环境空气污染和核酸片段气溶胶污染;
5)单位使用量少,使用成本低;
6)作用时间短,2小时内全部清理整个核酸实验室,节省人力擦拭;
7)材料兼容性好,对其它设备仪器和材料没有腐蚀性影响,人员安全。
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